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    慢病毒包裝質粒Mix JY03024 江苑生物
    慢病毒包裝質粒Mix JY03024 江苑生物
    • 慢病毒包裝質粒Mix JY03024 江苑生物

    慢病毒包裝質粒Mix JY03024 江苑生物

    產品報價:1200元

    更新時間:2022/9/27 12:18:05

    地:江蘇

    牌:江苑生物

    號:JY03024

    廠商性質: 生產型,貿易型,服務型,

    公司名稱: 南京江苑生物科技有限公司

    產品關鍵詞: 第二代   慢病毒   包裝   試劑盒  

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    楊先生 : (17714396632) (021-88553310)

    (聯系我時,請說明是在來寶網上看到的,謝謝?。?/b>


    產品簡介

    江苑生物的慢病毒包裝質粒MixPackaging Mix)為優化的全套慢病毒包裝輔助質?;旌衔?,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統。本產品附贈表達eGFP蛋白的對照質粒(eGFP Control),用于驗證慢病毒包裝效果。本公司還提供慢病毒包裝試劑盒(江苑生物 JY03021),包含全套的包裝組分和試劑。

    Packaging Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如:gag基因,編碼病毒的核心蛋白如基質蛋白、衣殼蛋白和核衣殼蛋白等;pol基因,編碼病毒復制所需的酶如反轉錄酶、整合酶和蛋白酶;rev基因,編碼調節gagpol基因表達的調節因子;還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因,提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包裝系統產生的慢病毒為“自殺”性病毒,即病毒感染目的細胞后不會再感染其他細胞,也不會利用宿主細胞產生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒。

    本產品具有慢病毒包裝時間周期短(一周之內即可獲得純化好的高滴度慢病毒)和病毒滴度高,可應用于針對不同基因和藥物靶標的細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。為了加速科研進程,江苑生物還提供細胞基因過表達、shRNA/siRNA介導的基因沉默、CRISPR/Cas9介導的基因敲除等服務。

    產品組分

    組分名稱

    儲存

    產品貨號/規格

    JY03024

    JY03025

    JY03026

    Packaging Mix

    -20℃

    100 μg (10 Tests)

    200 μg (20 Tests)

    400 μg (40 Tests)

    eGFP Control

    -20℃

    10 μg

    10 μg

    10 μg

    保存條件

    干冰運輸。-20℃保存, 避免反復凍融,1年有效。

    還需準備的其他實驗材料

    1.被包裝的慢病毒載體質粒:在慢病毒包裝前,需要先獲得含有目的序列的慢病毒載體,以無內毒素高純度的試劑盒提取慢病毒載體質粒,并將質粒DNA溶于無菌的TEddH2O中,測定其濃度及純度,保證質粒DNA A260/A2801.8-2.0之間。

    2.慢病毒包裝用293T細胞株:良好的細胞狀態對病毒的包裝至關重要,避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染,盡量使用傳代次數較少的細胞,如果細胞是剛復蘇的話,傳兩代之后再包裝。

    3.細胞培養基,血清和雙抗等

    4.質粒轉染試劑

    5.其他常用實驗耗材(如10 cm培養皿,離心管等)

    使用說明10 cm培養皿,為例):

    1293T細胞分盤:轉染前天,將293T細胞以合適的比例傳代到10 cm培養皿中,當細胞長到70%-90%時準備轉染。

    注:細胞要充分消化,成團細胞影響轉染效率。

    2轉染前換液:轉染前將293T細胞換成新鮮培養基,10 mL/10 cm皿?,F在的轉染試劑例如Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000、LipoSuper(江苑生物 JY03051)和其他轉染試劑,多不受血清和抗生素的影響,此處可換為含有血清和抗生素的完全培養基。具體需根據轉染試劑的要求換液。

    注:293T細胞貼壁性不是很好,換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。

    3.轉染:Packaging Mix表達目的序列的慢病毒載體質粒=11

    以使用LipoSuper(江苑生物 JY03051)轉染試劑為例:

    取一只無菌的離心管,加入750 μL DMEM(不含血清和抗生素),10 μg表達目的序列的慢病毒載體質粒(自行提供),和13.5 μL Packaging Mix10 μg,用槍輕輕吹打混勻;再加入24 μL LipoSuper,用槍輕輕吹打混勻,靜置5 min,請特別注意不可Vortex或離心。將混合液均勻滴加到提前換液的細胞培養基中,輕輕晃勻,置于培養箱中培養,后續無需在數小時后更換培養液。

    DMEM

    750 μL

    表達目的基因慢病毒載體質粒

    (或者eGFP Control,作為對照)

    10 μg

    (eGFP Control 10 μg)

    Packaging Mix

    13.5   μL

    LipoSuper

    32 μL

    注:上述混合液室溫存放6 h內穩定。

    某些細胞對轉染試劑比較敏感,可以在轉染后8-12小時更換細胞培養液,轉染效率無顯著影響。

    以使用Lipofectamine 3000Invitrogen L3000015)轉染試劑為例:

    取兩只無菌的離心管,一只加入500 μL Opti-MEM32 μL Lipofectamine 3000,用槍輕輕吹打混勻;另一只加入500 μL Opti-MEM 10 μg表達目的序列的慢病毒載體質粒(自行提供)、13.5 μL Packaging Mix10 μg40 μL P3000試劑,用槍輕輕吹打混勻。將兩管液體混合,再次用槍輕輕吹打混勻,不可Vortex或離心,室溫孵育10-15 min。將混合液均勻滴加到提前換液的細胞培養基中,輕輕晃勻,置于培養箱中培養,后續無需在數小時后更換培養液。

    一管

    Opti-MEM

    500 μL

    Lipofectamine 3000

    32 μL

    二管

    Opti-MEM

    500 μL

    表達目的基因慢病毒載體質粒

    (或者eGFP Control,作為對照)

    10 μg

    (eGFP Control 10 μg)

    Packaging Mix

    13.5   μL

    P3000

    40 μL

    注:某些細胞對轉染試劑比較敏感,可以在轉染后8-12小時更換細胞培養液。

    InvitrogenProtocol顯示10 cm培養皿Lipofectamine 3000推薦使用21.7 μL或者43.4 μL兩種劑量,自行探索哪個劑量更為合適。本實驗室在檢測該包裝質粒時,選用的劑量為32 μL

    4.病毒收集:轉染36 h左右后,吸取上清至新的離心管中,4保存。另外添加10 mL新鮮的完全培養基到細胞中,注意不要沖起細胞。再次大約36 h后,收取上清至同一個離心管中。將兩次收集的上清用0.45 μm濾器過濾后轉移到新的離心管中(若沒有0.45 μm濾器,將上清3000 rpm,4 ℃離心5 min,棄沉淀亦可)。此時上清液中的病毒顆??梢灾苯訖z測滴度或者感染目的細胞,如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可對上清液進行濃縮與純化。

    注:如果使用濾器過濾,只能使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不能用硝酸纖維素膜(NC)。

    5.(可選)慢病毒濃縮:可以使用江苑生物的慢病毒濃縮試劑盒(JY03011進行慢病毒濃縮,效率更高。同時,也可以自行配制PEG-8000慢病毒濃縮液濃縮慢病毒。

    注:慢病毒滴度測定方法參考(江苑生物網站新聞中心)

    6.病毒分裝與保存:將病毒上清或濃縮后的病毒分裝,保存于-80℃。

    注:病毒液一定要分裝,切忌反復凍融,凍融一次病毒滴度將降低20-60%。


    注意事項

    1.廢棄的含病毒的培養基中加入84消毒液(1:20左右),浸泡1天后丟棄。接觸過病毒的槍頭,離心管,培養板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理,也可以用煮沸處理半小時或常規滅菌(121℃,20 min)。

    2.本產品僅用于科學研究。

    3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    相關產品

    產品編號

    產品名稱

    產品規格

    JY03011/JY03012

    慢病毒濃縮試劑盒

    50 mL/100   mL

    JY03013/JY03014

    PEG-8000慢病毒濃縮液

    50 mL/100 mL

    JY03021/JY03022/JY03023

    慢病毒包裝劑盒

    10T/20T/40T   (10cm dish)

    JY03024/JY03025/JY03026

    慢病毒包裝質粒Mix

    100 μg/200   μg/400 μg

    JY03027/JY03028

    慢病毒包裝質粒 pMD2.G

    1 μg/100 μg

    JY03029/JY03030

    慢病毒包裝質粒 psPAX2

    1 μg/100 μg

    JY03031/JY03032

    慢病毒包裝質粒 pCMV-VSV-G

    1 μg/100 μg

    JY03033/JY03034

    慢病毒包裝質粒 pCMV-dR8.91

    1 μg/100 μg

    JY03035/JY03036

    慢病毒包裝質粒 pMDLg/pRRE

    1 μg/100 μg

    JY03037/JY03038

    慢病毒包裝質粒 pRSV-Rev

    1 μg/100 μg